IVPT测试
在IVPT测试中，我们经常需要使用真实的皮肤作为我们的实验材料来研究药物对皮肤的渗透性。因此，了解皮肤的特性，了解皮肤的准备，评估皮肤的完整性对于IVPT研究非常重要。今天瑞拓的小编在这里分享一些瑞拓在IVPT测试中关于皮肤研究的相关知识，希望对研究扩散实验的老师有所启发。
皮肤:
皮肤是人体的天然屏障和净化器。一方面，皮肤对身体有各方面的保护; 但皮肤并不是一个绝对紧密的、不渗透的屏障 (图1)，皮肤也有一定的渗透和吸收作用。
图1人体皮肤结构
通常，水和水溶性组分不能从皮肤吸收。油和油溶性成分可以通过皮肤吸收。对于皮肤表皮的使用，如收敛，杀菌，漂白等，使用水溶性药物是合适的; 而一些在体内起作用的营养素和药物是油溶性药物。
外界物质渗入皮肤是皮肤吸收小分子物质的主要通道。物质进入皮肤的可能途径通常如下:
1，软化角质层，通过角质层细胞膜渗透到角质层细胞中，然后可能通过表皮进入真皮；
2，少量不易渗透的大分子和水溶性物质，可通过皮肤毛囊，皮脂腺和毛囊壁进入皮肤深层真皮，然后从真皮扩散到各处；
3，一些超细分子物质通过角质层的细胞间隙渗透到真皮中。
进入皮肤:
1，完全吸收，进入皮肤微循环。
2，与角质层或皮下脂肪结合形成所谓的记忆，该记忆缓慢释放并进入微血管。
3，由皮肤中的各种酶代谢。
角质层是影响皮肤渗透和吸收的最重要部分。软化的皮肤可以增加渗透和吸收。皮肤表皮的角质层可以吸收更多的水分，尤其是在皮肤渗入水分后，或通过涂层的方法可以增加皮肤的水分，改善皮肤的吸收; 动物脂肪，酸性化合物，激素等，更容易被皮肤吸收; 植物油比动物油更难吸收; 矿物油、水和固体物质不易吸收; 粉末、水溶液和悬浮液系统的吸收性一般较差; 软膏可以浸软皮肤，防止水分挥发，从而增加吸收。有机溶剂由于其对皮肤的强渗透性也可以增加吸收。气体可以进入皮肤。当某些物质的浓度较高时，吸收降低。例如，当酸的浓度较高时，它会与皮肤蛋白质结合形成薄膜，以防止皮肤吸收。
皮肤
近十年来，经皮渗透研究中常用的动物可分为两类，即无毛动物和无毛动物。多毛动物主要有无毛小鼠、无毛大鼠、蛇等，多毛动物有小鼠、大鼠、豚鼠、猪、兔等。多毛动物和无毛动物皮肤的结构差异主要是皮肤附属物的差异。药物可以通过皮肤附属物吸收，吸收速度也较快，但吸收面积只占整个皮肤的0.1% 到1%，因此不是经皮吸收的主要途径。不同动物的皮肤通透性不同。研究表明，猪和猴的皮肤通透性与人的皮肤相似，兔、大鼠和豚鼠的皮肤通透性大于人的皮肤。选择动物模型时应注意。
猪皮对药物的渗透性更接近人的皮肤 (详见表1)，2 ~ 3月龄猪皮的解剖生理特性最接近人的皮肤。选择猪皮作为透皮吸收研究模型是理想的。猪背部和耳朵通常用于皮肤提取。
表1人与3月龄仔猪皮肤结构厚度比较
在进行体外透皮吸收试验时，提供猪的种系、性别、年龄和体重等相关数据以及用于渗透研究的体表部位。
1。研究动物选择的透皮试验
阅读国内有关体外透皮研究的相关文献，发现实验动物的选择、离体皮的制备以及皮的保存方法各不相同。
实验动物:
1。种系包括巴马小香猪和普通仔猪
2，男女和男性
3、月龄普通仔猪一般选择10-15日龄或20-30日龄，巴马小香猪一般选择1月龄或2-3月龄
4。重量包括8-15kg或35-40千克
5。皮肤去除部位包括背部、腹底部、腹侧部分、耳朵、普通背部、腹部皮肤和较少使用的耳朵 (见表2)
表2 30 ~ 35日龄健康仔猪不同部位皮肤厚度比较
2。孤立皮肤
选择2-3个月大的巴马香猪，清洁全身皮肤，用手术刀或电动脱毛机仔细刮掉背部和耳朵皮肤的外套 (无划痕)，24小时后，切断前肢动脉造成缺血死亡，剥去皮肤，将皮肤铺在干净的玻璃板上，让角质层向下，用小刀片或其他钝器蘸生理盐水去除皮下脂肪，组织和毛细血管，然后用生理盐水反复冲洗，干燥，用铝箔纸将其包裹在安全盒中，并在-22 ℃ 的冰箱中保存 (不超过1个月) (下图2)。实验前每隔一天取出解冻的冷冻液 (0 ~ 5 ℃)，用生理盐水反复清洗直至澄清。
注意事项: 实验前不得损伤巴马香猪的皮肤。
图2皮肤准备
皮肤完整性试验
皮肤对体外皮肤通透性研讨的成果有很年夜的影响，同时也会产生数据变异性。各国的法律法规都涉及到皮肤完整性的研究。
表3国家法规中关于皮肤完整性的规定
皮肤完整性测试，除了目视检查外，建议在每个实验中至少进行以下完整性测试中的一种或两种，然后将皮肤安装在弗朗兹扩散池上。根据文献报道，常用的皮肤完整性检测方法有以下几种:
(1)TWP (氚水法)氚水法
(2) 透皮阻力法 (TEER)经皮电阻法
(3) 透皮失水法(TEWL) 经皮失水法
氚水法: 为了确定氚标记水的吸收特性，受体隔室充满生理盐水。将无限剂量的氚施用于皮肤表面。在不同时间点 (0.5、1、2、3、4和5小时) 收集受体溶液，并测量氚。计算渗透常数 (Kp) 以判断皮肤的完整性。
经皮电阻法: 皮肤电阻，用电阻值k Ω 表示，用惠斯通电桥记录皮肤对离子的渗透性，是一种简单稳定的评价皮肤屏障功能的方法。例如，该测试使用Anle杀死的28至30日龄大鼠的皮肤，并根据皮肤角质层损失的程度和皮肤屏障功能的降低 (低于阈值) 来鉴定皮肤是否受损。
经皮失水法: 经皮失水也称为经皮失水，这表明真皮深层的水通过表皮的蒸发而流失。它是描述皮肤完整性的重要参数。它与角质层的含水量密切相关。TEWL值越高，角质层的屏障功能越差。经皮水分流失 (TEWL) 广泛用于评估皮肤的屏障功能。TEWL定义为每单位时间通过角质层扩散到每个皮肤表面的水蒸气量，用g · m-2 · h-1表示。
下面，我们重点介绍TEER经皮电阻法
1。仪器和药物测试
液相色谱仪; RT8 Franz扩散池，隔离皮肤电阻测试仪。
2。试验方法
皮肤模型电阻抗测试仪
将待测试的实验皮肤切片 (实验分离的皮肤、3D重组表皮模型等) 夹在两个腔之间，每个腔注射0.9% NaCl溶液，并且在每个腔中插入氯化银电极以测量电极之间的电阻抗。评估方法根据所使用的电池而变化。作为经皮吸收实验的准备，根据电阻抗测量的结果评估和筛选所使用的皮肤膜的特性。此外，具有降低的屏障功能的角质层细胞倾向于具有较低的阻抗，并且从水和角质层的电阻抗来评估生物皮肤屏障功能。
