聊一聊 IVPT 试验中样品分析方法的选择
在 体外渗透研究（IVPT）研究中，需要对“药物组织分布与质量平衡”进行研究，根据EMA要求，活性物质渗透进入接收液的总量、皮肤组织中活性物质的总量和残留在皮肤或试验设备上的总量之和应在90%～110%范围内；根据研究的目的，可能需要提供关于药物组织分布（角质层、活性表皮层和真皮层中药物的量）的评估。
对于药物组织分布的评估，FDA建议在实验结束时，可先用棉签去除皮肤表面多余的制剂，然后用胶带剥离法去除角质层，再将皮肤切片放置在铝箔上，于60 ℃干热条件下孵育2～3 min，最后用镊子将表皮层与真皮层分离开（通过刮擦）。
在IVPT方法开发过程，样品分析方法的选择至关重要，如残留在皮肤上和皮肤组织中样品的处理、渗透进入接收液总量的分析方法选择等。
下面对样品分析及相关处理方法进行介绍：
通常，在实验结束时先用干棉签去除皮肤表面大部分的配方制剂，再用湿棉签擦拭，在方法开发过程中，需确定干棉签和湿棉签使用的数量以及样品擦拭的方式；最后用胶带剥离。在胶带剥离时，EMA要求胶带应满足以下要求：①与皮肤表面磨擦后，不损失重量；②药物易于从粘附在胶带上的角质层中提取；③胶带的粘合剂或其他成分不干扰药物的定量测定；④胶带应有足够的粘合力，即使采用较少的胶带数量也可以除去大部分的角质层。
一般情况下，皮肤组织内样品可采用高比例有机溶剂（如甲醇、乙醇和乙腈等）或强碱性溶液等进行超声、振荡或浸泡提取，亦可以采用消解试剂（如Soluene-350）将皮肤组织消解后进行测定。但采用强碱或消解试剂（如Soluene-350）对样品的稳定性研究较高，采用甲醇等直接提取所需的时间较长（通常大于6~8小时以上）。
为提高提取的效率，减少提取时间，通常可将皮肤进行剪碎，或采用猪皮粉碎机进行均质化处理，可确保快速、充分的对样品进行提取。（合邦兴业猪皮粉碎机可同步对2~24个样品进行处理，示例图如下，欢迎联系咨询）
通常在方法开发过程中，需对不同溶剂、不同提取方式进行筛选，选择提取时间短、操作方便且能保持药物稳定的提取方式。此外，由于皮肤组织的复杂性及药物滞留量较低（通常为μg/cm2级别），在色谱方法选择时，需重点关注方法的检测灵敏度及皮肤组织对样品检测的干扰。
USP<1724>指出，接收液中药物的浓度一般在pg～ng范围内；郭涤亮[38]等报道阿昔洛韦乳膏欧美不同国家参比制剂单位面积药物渗透速率约在10～60 ng/cm-2/h-1之间。在对接收液中样品进行测定时，通常采用高效液相色谱-质谱法或超高效液相色谱-质谱法。FDA要求采用多点校准曲线（6～8个）进行测定，同时应符合FDA生物分析方法验证行业指南要求。此外，在方法开发过程中，因样品量较低，需对样品处理方法进行考察，如滤膜过滤或离心等，如采用滤膜过滤进行处理，需确保滤膜对样品无吸附。
